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石蜡切片过程中,两次脱水的目的是什么?
切片,石蜡,酒精石蜡切片过程中,两次脱水的目的是什么?
发布时间:2019-02-08加入收藏来源:互联网点击:
净的吸水纸,将含材料的载玻片从二甲苯中取出放在纸上(切片的一面向上),迅速地在切片的中央滴一滴树胶(千万不能待二甲苯干燥后再进行),用右手持小镊子轻轻地夹住盖玻片的右侧,稍为倾斜使其左侧与封藏剂接角,然后再缓慢地将盖玻片放下,这样就可以减少或避免产生气泡。如胶液不足,可以用玻棒再滴一滴树胶从盖玻片边缘补足。如胶液过多,可在干燥以后用刀刮去,并用纱布蘸二甲苯拭去残留的树胶。
染色结果:细胞核被苏木素染成蓝色,细胞质被伊红染色呈粉红色。
[实验报告]
1、简述石蜡切片的主要过程。
2、分析影响HE染色的主要因素。
石蜡切片法实例(二)
——番红-固绿对染法
一、目的要求
1、 熟悉植物石蜡切片的制作过程。
2、 掌握番红-固绿对染法的基本原理和具体方法。
二、实验原理
石蜡切片法也是在研究植物细胞的形态结构等方面常用的制片方法。它可以使植物材料切成薄的薄片,又可以切成连续薄片,切片经染色,观察效果甚好。番红-固绿对染法,为
植物制片上最普遍的一种二重染色法,其染色程序简单并能清晰地显示出细胞的结构。番红为碱性染料,能使细胞核及木质化的细胞壁染成红色;固绿为酸性染料,能使细胞质及纤维素的细胞壁染成绿色。
三、实验用品
(一) 器材
切片刀,切片机,温箱,温台,解剖刀,镊子,单面刀片,台木,毛笔,蜡铲,酒精灯,包埋纸盒,染色缸,玻片盘,温度计,脸盆。
(二)试剂
FAA固定液,1%番红,1%固绿,各级酒精(30%、50%、70%、80%、90%、95%、100%),二甲苯,石蜡,郝普特氏明胶粘片剂,树胶。
试剂配法:
1、FAA固定液(福尔马林-醋酸-洒精混合液)
福尔马林 5 ml
50%或70%的洒 90 ml
冰醋酸 5 ml
此液适用于植物组织,此液中的酒精,有用50%的,也有用70%的,一般薄嫩的材料右用50%的,厚硬的材料用70%的,醋酸的用量也可根据材料情况作适当的改变,对一些大块而密实的组织可增加用量,同时减少福尔马林的用量。固定时间可因材料及醋酸含量的变化而异,一般为5~20h。固定的材料,一般无需用水洗,可直接从70%的酒精开始脱水。
1、 1%番红
番红1g溶于100ml水中。
2、 1%固绿
1g固绿溶于100ml95%酒精中。
3、 郝普特氏明胶粘片剂
明胶 1g
蒸馏水 100ml
石炭酸 2g
甘油 15ml
配制时先将明胶溶解于30
0℃的蒸馏水中(在水浴锅内进行),待溶解后再加石炭酸和甘油,搅拌均匀后,趁热过滤,贮存于玻璃瓶中。
(三)材料
大豆、小麦、绿豆、洋葱、大蒜、蚕豆等。
三、实验程序
1、 取材
取已培养好的大豆、小麦、蚕豆根或茎、叶等用刀
片将其尖端约1.2cm根尖切割下来,用刀
片切割其成熟区部分成5mm长的小段(亦可切带侧根的部分),将切好的材料放入玻管中。
2、 固定
将FAA固定液倒入盛有材料的玻管中,固定时间为24h。
3、 冲洗
用70%酒精换洗3次,每次0.5-2h。
4、 脱水
80%、90%酒精各1-2h,纯酒精(中间换一次)1-2h。
5、 透明
等量纯酒精及二甲苯中1-2h,二甲苯(中间换一次)1-2h。
6、 透蜡
方法同前。
7、 包埋
方法同前。
8、 切片
根为横切面,其厚度为8~10um。
9、 贴片。
方法同前。
10、 番红-固绿对染法染色程序如下:
(1)切片在二甲苯中脱蜡,约10min。
(2)等量纯酒精二甲苯5min。
(3)经纯酒精,95%、90%、80%、70%、505、305各级酒精各5min。
(4)蒸馏水2-5min。
(5)1%番红水溶液染色2h左右。
(6)用水洗去多余染液。
(7)50%、70%、80%、90%、95%各级酒精脱水10min。
(8)1%的固绿(用95%酒精配制)染色10-40s。
(9)95%酒精洗一下。
(10)纯酒精脱水5min。
(11)等量纯酒精二甲苯混合液中5min。
(12)二甲苯5min。
(13)中性树胶封藏。
注意:
(1)番红与固绿在酒精中很容易脱色,因此在酒精中脱水时,不能放置太久。
(2)用固绿对染之前应检查番红染色的是否合适,所染颜色应稍深一些,以防其在以后脱水步骤中仍会脱色,如果太浅,应退回重染。
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