您现在的位置: 首页 > 网站导航收录 > 百科知识百科知识
石蜡切片过程中,两次脱水的目的是什么?
切片,石蜡,酒精石蜡切片过程中,两次脱水的目的是什么?
发布时间:2019-02-08加入收藏来源:互联网点击:
(5)如需过夜,应停留在70%酒精中。
(6)脱水必须彻底,否则不易透明,甚至使透明剂内出现白色混浊现象
5、透明
纯酒精、二甲苯等量混合液15min,二甲苯0.5h(或至透明为止),须换一次二甲苯。
由于乙醇与石蜡不相溶,而二甲苯既能溶于乙醇又能溶于石蜡,所以脱水后还要经过二甲苯以过渡。当组织中全部被二甲苯占有时,光线可以透过,组织呈现出不同程度的透明状态。
透明注意事项
(1)使用透明剂时,要随时盖紧盖子,以免空气中的水分进入。
(2)更换每级透明剂,动作要迅速,一方面为了不使材料块干涸,另一方面能避免吸收湿气。
(3)在透明过程中, 如果材料周围出现白色雾状,说明材料中的水未被脱净,应退回纯酒精中重新脱水,然后再透明。
6、透蜡
放入二甲苯和石蜡各半的混合液15min,再放入石蜡Ⅰ、石蜡Ⅱ透蜡各20~30分钟。
透蜡的目的是除去组织中的透明剂(如二甲苯等),使石蜡渗透到组织内部达到饱和程度以
便包埋。透蜡时间根据组织的透蜡时间较长,约需1~2d。透蜡应在恒温箱内进行,并保持箱内温度在55~60℃左右,注意温度不要过高,以免组织发脆。置于恒温箱0.5h。
透蜡注意事项
(1)尽量保持在较低温度中进行,以石蜡不凝固为度;
(2)透蜡温度要恒定,不可忽高忽低;
(3)操作要迅速,力求在最短的时间内完成石蜡透入过程,以免引起组织变硬、变脆
、收缩等。
1、 包埋
将经过透蜡的组织连同熔化的石蜡,一起倒入容器内,然后立即投入冷水中,使其立刻凝固成蜡块。
用于包埋的石蜡的熔点在50~60℃之间,包埋时应根据组织材料、切片厚度、气候条件等因素,选择不同熔点的石蜡。一般动物材料常用的石蜡熔点为52~56℃,植物材料用的石蜡熔点为54~58℃。
包埋的操作过程
包埋时,将纸盒放在已经加热的温台上,从温箱中取出盛放纯石蜡的蜡杯,倒入包埋用的纸盒中,取出存放材料的蜡杯3,迅速轻轻地用镊子夹取材料平放于纸盒底部(注意切面朝下放置),再用温镊子轻轻拨动材料,使之排列整齐。轻轻将纸盒两侧的把手提起,慢慢地平放在面盆,并立即使它沉入水中,使盒中包埋块迅速凝固。待石蜡完全凝固(约30min)后即可取出备用。
2、 切片
①将已固定和修好的石蜡块台木装在切片机的夹物台上。
②将切片刀固定在刀夹上,刀口向上。
③摇动推动螺旋,使石蜡块与刀口贴近,但不可超过刀口。
④调整石蜡块与刀口之间的角度与位置,刀片与石蜡切片约成15度左右。
⑤调整厚度调节器到所需的切片厚度,一般为4~10微米。
⑥一切调整好后主可以开始切片。此时右手摇动转轮,让蜡块切成蜡带,左手持毛笔将蜡带提起,摇转速度不可太急,通常以40~50r/min。
⑦切成的蜡带到20~30cm长时,右手用另一支毛笔轻轻将蜡带挑起,以免卷曲,并牵引成带,平放在蜡带盒上,靠刀面的一面较光滑,朝下,较皱的一面朝上。
⑧用单面刀片切取蜡片一小段,放在载玻上加水一滴,置于放大镜或显微镜下观察切片是否良好。
⑨切片工作结束后,应将切片刀取下用氯仿擦去刀上沾着的石蜡,把切片机擦拭干净妥为保存。
3、 贴片
①、取一片清洁的载玻片,滴一滴粘片剂于玻片中央,然后用洗净的手指加以涂抹,便成
均匀薄层。
②、滴1~2滴的蒸馏水已涂粘片剂的载玻片上。
③、用小镊子夹取预先用刀片割开的蜡带,放在水面上,注意蜡片光亮平整的一面贴于玻片上,并使之处于稍偏玻片的一端,另一端便于粘贴标签。
④、把玻片摆好片位置,在酒精灯火焰上方适度加热至蜡片舒展。或放置置于预先加热的展片台上(温度保持在40~45℃)。此时蜡片因受热而伸展摊平。并使之处于稍偏玻片的一端,另一端便于粘贴标签。
⑤、展片后把载玻片放在平盘上编好记号置于37℃温箱烘干,一昼夜干燥后即可取出存放于切片盒待染。
10、脱蜡复水
石蜡切片经二甲苯Ⅰ、Ⅱ脱蜡各5~10min,然后放入100%、95%、90%、80%、70%等各级酒精溶液中各3~5min,再放
入蒸馏水中3min。
染色液多数为水溶液,因此,染色前必须将蜡脱去,使切片中的材料由有机相进入到水相。一般采用二甲苯脱蜡,逐级复水与脱水浸蜡过程正好相
反,但是,由于蜡片较薄,所需时间比脱水浸蜡要短的多。
11、染色
切片放入苏木精中染色约10~30min。染色时间应根据染色剂的成熟程度及室温高低,适当缩短或延长。室温高时促进染色,染色时间可短些,否则可适当延长时间,冬季室温低时可放入恒温箱中染色。
12、水洗
用自来水流水冲洗约15min。冲洗过程中使切片颜色发蓝(或放入碱性水中也可,但用促蓝剂对伊红可能拒染,如果时间来得及,应以流水冲洗使切片显示蓝色为宜),但要注意流水不能过大,以防切片脱落,并随时用显微镜检查见颜色变蓝为止。
13、分化
就是将细胞质着的色褪去,使细胞核着色更加鲜明,也称分色。将切片放入1%盐酸乙醇液(盐酸1份+70%乙醇100份)中褪色,见切片变红,颜色较浅即可,约数秒至数十秒钟。这一步骤是H.E.染色成败的关键,,如分化不当会导致染色不匀,或深或浅,得到的切片染色效果差。如果染色适中,可取消此步骤。
14、漂洗
切片再放入自来水流水中使其恢复蓝色。低倍镜检查见细胞核呈蓝色、结构清楚;细胞质或结缔组织纤维成分无色为标准。然后放入蒸馏水中漂洗一次。
15、脱水Ⅰ
切片入50%乙醇→70%乙醇→80%乙醇中各3~5min。
16、复染
用0.5%伊红乙醇液对比染色2~5min。伊红主要染细胞质,着色浓淡应与苏木精染细胞
核的浓淡相配合,如果细胞核染色较浓,细胞质也应浓染,以获得鲜明的对比。反之,如果细胞核染色较浅,细胞质也应淡染。可在伊红乙醇液中滴加数滴冰醋酸助染,促使细胞质容易着色,并且经乙醇脱水时不易褪色。
17、脱水Ⅱ
放入95%乙醇中洗去多余的红色,然后放入无水乙醇中3~5min。最后用吸水纸吸干多余的乙醇。
18、透明
切片放入二甲苯-乙醇等量混合液中约5min,然后放入纯二甲苯Ⅰ、Ⅱ中各3~5min。二甲苯应尽量保持无水,应经常更换,或用纱布包无水硫酸铜放入染色缸内吸收水分。切片如在二甲苯中出现白雾现象,说明脱水未尽,应退回乙醇中重新脱水,否则切片难以镜检。
19、封藏:中性树胶封存
切片经染色、脱水、透明后,即可用封藏剂将其封藏起来,目的是永久保存切片,便于镜检。常用的封藏剂一类为干性封藏剂如中性树胶、加拿大树胶等,另一类为湿性封藏剂如甘油明胶等。如果切片是经二甲苯透明,则用树胶作为封藏剂,树胶可以用二甲苯稀释至合适的稠度。如果切片是
接从水中或水溶液中取出,则常用甘油明胶作为封藏剂,可用于短期保存标本。
封藏的方法:
封片前应根据材料的大小,选用不同规格的盖玻片。材料透明后,按照下列方法进行封藏。在桌上放一张洁
上一篇:小区物业为什么不自己搞充电桩呢?
下一篇:返回列表
相关链接 |
||
网友回复(共有 0 条回复) |