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dntp是什么(dntp是什么意思)
基因,转录,序列dntp是什么(dntp是什么意思)
发布时间：2019-02-08加入收藏来源：互联网点击：
1．隔离不同操作区，包括样品制备区、PCR操作区和反应产物分析区
2．严格实验操作
3．设立实验对照：阳对照、阴对照、试剂对照
176．筑巢PCR：先用一对外侧引物扩增含目的基因的大片段，再用一对内侧引物以大片段为模板扩增获取目的基因。筑巢PCR可以提高PCR的效率和特异。
177．多重PCR：是在一次反应中加入多对引物，同时扩增一份DNA样品中不同序列的PCR过程。由于每对引物扩增区位于模板DNA的不同部位，因而扩增片段长短不同。由此检测是否存在某些基因片段的缺失或突变。
178．共享引物PCR：是利用3条引物扩增两种不同的DNA序列，其中一条引物与两种待扩序列都互补，它与另两条引物分别组成两对PCR引物。这种PCR方法常用于细菌学鉴定，确定同一种属细菌的不同种类。
179．原位PCR:以组织固定处理细胞内的DNA或RNA为靶序列，进行PCR反应的过程，称为原位PCR。原位PCR不需从组织细胞中分离模板DNA或RNA。原位PCR成为靶基因序列的细胞定位、组织分布和靶基因表达检测的重要手段。
180．RT－PCR：是将RNA的反转录反应和PCR反应联合应用的一种技术。首先用RNA为模板，在反转录酶作用下合成cDNA，再以cDNA为模版通过PCR反应来扩增目的基因。RT-PCR是目前从组织或细胞中获得目的基因以及对已知序列的RNA进行定定量分析的最有效方法之一。
181．实时PCR（Real time PCR）: Real time PCR的基本原理是引入了荧光标记分子，使得在PCR反应中产生的荧光信号与PCR产物量成正比，对每一反应时刻的荧光信号进行实时分析，计算出PCR模版DNA的含量。探针的5’端有一个荧光报告分子，3’端有一个荧光淬灭分子。没有扩增反应时，探针保持完整，无荧光信号释放。随着PCR的进行，TaqDNA聚合酶在链延伸过程中遇到与模板结合的荧光探针，其5’-3’外切核酸酶就会将该探针逐步切断，报告荧光基团一旦与淬灭基团分离，便产生荧光信号。后者被荧光检测系统接收，用于数据分析。
182．基因组DNA文库的构建：
基因组DNA文库是指包含某一个生物细胞全部基因组DNA序列的克隆群体，它以DNA片段的形式贮存着某一生物的全部基因组DNA信息。
基因组DNA文库的构建过程：将纯化的细胞基因组DNA用适当的限制内切酶消化，获得一定大小的DNA片段，将这些片段克隆到噬菌体载体中，从而获得一群含有不同DNA片段的噬菌体，这就是基因组DNA文库。
183．cDNA文库及构建：
cDNA文库是包含某一组织细胞在一定条件下所表达的全部mRNA经反转录而合成的cDNA序列的克隆群体，它以cDNA片段的形式贮存着该组织细胞的基因表达信息。
cDNA文库的构建：将组织细胞中的mRNA经过反转录合成从cDNA，后者被克隆进入质粒或噬菌体载体，转化宿主细胞后可获得克隆群体。
184.转基因动物：是指用人工方法将外源基因导入或整合到基因组内，并能稳定传代的一类动物。
185．导入基因的主要方式：显微注射法、胚胎干细胞法、逆转录病毒感染法。
186．基因打靶的必备条件：胚胎干细胞、打靶载体
187．打靶载体的筛选标志：neo（新霉素）阳筛选标志；HSV-tk阴筛选标志。
188．基因敲除的基本程序：
1．打靶载体的构建
2．打靶载体导入ES细胞
3．基因敲除ES细胞注射入胚泡
4．胚泡植入假孕小鼠的子宫中
5．嵌合体的杂交育种
189．构建打靶载体的基本过程
1．获得目的基因的同源片段，将此DNA片段克隆到一般的质粒载体中
2．从重组质粒中切除目的基因的大部分同源DNA序列，只留部分序列在线质粒载体的两端
3．将neo基因克隆到带有目的基因同源顺序的线质粒中，使之位于残留目的基因同源顺序的中间
4．在目的基因同源顺序的外侧线化重组质粒载体，将HSV-tk基因克隆到此线载体中
190．DNA芯片技术：是指在固相支持物上原位合成寡核苷酸或者直接将大量DNA探针以显微打印的方式有序地固化于支持物表面，然后与标记的样品杂交，通过对杂交信号的检测分析，即可得出样品的遗传信息（基因序列及表达的信息）。由于常用计算机硅芯片作为固相支持物，所以称为DNA芯片。
191．DNA芯片可分为：原位合成芯片和DNA微集阵列
192．原位合成芯片：采用显微光蚀刻等技术在芯片的特定部位原位合成寡核苷酸而制成的芯片称为原位合成芯片。
193．DNA微集阵列：将预先制备的DNA片段以显微打印的方式有序地固化于支持物表面而制成的芯片称为DNA微集阵列。
194.DNA芯片技术的方法主要包括芯片的制备、样品的制备、分子杂交和检测分析。
195．原位合成芯片是采用显微光蚀刻或压电打印技术。
196．DNA芯片技术的应用：DNA序列测定、基因表达分析、基因组研究、基因诊断、药物研究与开发
197．癌基因：是细胞内控制细胞生长的基因，具有潜在的诱导细胞恶转化的特。癌基因表达异常时，其产物可使细胞无限制分裂。癌基因包括细胞癌基因和病毒癌基因。
198．原癌基因：正常细胞内未被激活的癌基因称为原癌基因。
199．病毒癌基因与细胞癌基因的比较：
相同之处：两者结构十分相似、序列上存在一定程度同源、产物也基本相似。
不同之处：
1．病毒癌基因与细胞癌基因相比，通常丢失了两端的某些序列。
2．病毒癌基因没有内含子，而细胞癌基因中通常含有内含子或插入序列。
3．病毒癌基因与同源的细胞原癌基因在外显子序列中也有微小的差别。
4．病毒癌基因常会出现碱基取代或碱基缺失等突变，而细胞癌基因则较少发现这一类病变。
200．癌基因家族包括：src家族、ras家族、myc家族、sis家族、erb家族
201．抑癌基因：是指存在于正常细胞中的一大类可抑制细胞生长并具有潜在抑癌作用的基因，当这类基因发生突变、缺失或失活时可引起细胞恶转化而导致肿瘤的发生。
201．癌基因表达产物：
1．细胞外的生长因子
包括生长因子、激素、神经递质、药物等
2．跨膜的生长因子受体
3．核内转录因子
4．非受体酪氨酸蛋白激酶
5．G蛋白
202．癌基因的活化机制：
1．点突变
2．基因重排
3．原癌基因扩增
4．获得启动子与增强子
5．染色体易位
203．基因诊断常用的技术
1. 核酸分子杂交
2．PCR
3．DNA序列测定
4．DNA芯片技术
5．限制酶酶谱分析
6．单链构象多态检测
204．单链构象多态（SSCP）：DNA经变形成单链后，在中条件下单链DNA会因其分子内碱基之间的相互作用，形成一定的立体构象。相同长度的单链DNA，如果碱基组成和(或)排列顺序不同，形成的构象就不同，这就形成了单链构象多态。
205.基因诊断的应用
1．对遗传病的防治
2．对肿瘤进行诊断
3．感染疾病的基因诊断
4．传染疾病的诊断
5．对重大疾病易感的诊断
6．器官移植配型
7．法医学的应用
206．基因诊断的特点
1．以基因作为检查材料和探查目标，属于“病因诊断”，针对强。
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