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lb培养基(冻干培养细菌的方法)

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发布时间：2020-12-06加入收藏来源：互联网点击：

1. 冻干简介：

冷冻干燥，也称为冻干或冷冻干燥，是在产品冷冻后除去水分并将其置于真空中的过程。这使得冰可以从固体变为蒸汽，而无需经过液相。冰（或其他冷冻溶剂）通过升华过程从产品中可以去除，是结合水分子通过解吸过程去除。
※ 常用细菌培养基：肉汤培养基和普通琼脂培养基，LB培养液，TSB培养液，TSA培养基等，FT培养液，TSC培养基，麦康凯培养基，血琼脂平板。


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2. 什么情况下适合冷冻干燥
长期保存细菌、真菌、酵母或其他微生物培养物的最佳方法之一是使用冷冻干燥过程。这一简短的实验室程序可以与任何商用冷冻干燥器一起进行，以保存培养物收集。
因为冷冻干燥是最复杂和最昂贵的干燥形式，所以该过程通常仅限于价值较高的细腻、热敏材料。未被冷冻损坏的物质通常可以冻干，因此无需冷藏。
冻干的过程可能只需要三个小时，也可能需要24小时（不包括培养物生长时间）。

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3. 实验所需仪器
※ 冷冻干燥机
※ 高压灭菌器
※ 营养素或其他合适的琼脂平板
※ 培育培养物的孵化器
※ 玻璃棒
※ 冻干缓冲液
※ 用橡皮塞压接顶部小瓶（用压接器压接瓶盖）

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4. 冻干及存储过程需要的试剂
※ 常用冻干保护剂：10%脱脂奶粉，5%蔗糖，1%明胶，溶于纯水中
※ 冻干保护剂的作用：冻干保护剂是在在冻结和干燥过程中，可以防止活性组分发生变性。
※ 填充剂：能防止有效组分随水蒸汽一起升华逸散，并使有效组分成形。
※ 抗氧化剂：用作防止生物制品在冷冻干操过程以及储藏过程中发生氧化变质。
※ 酸碱调整剂：在冷冻干澡过程和储藏过程中，能将生物制品的pH调整到活性物质的最稳定区域。

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5. 冻干的步骤
a. 所有冻干培养基、保护剂以及容器等均需高温高压灭菌。高压灭菌前，在试管内贴上印有培养物标识的纸标签。或者，使用带无菌帽的试管；
b. 取一环分离后所得到的细菌菌液或者是甘油保存的菌液，在细菌培养板上分区或者使用蛇形划板（大肠杆菌在麦康凯平板上划板），37℃倒置培养并过夜；
c. 取一只干净并且进行高温高压灭菌后的试管，倒入大约10ml的细菌培养液（大肠杆菌用磅培养液），从过夜培养后的培养平板中取一个单菌落至该培养液中后，在37℃温度条件下振荡培养过夜；
d. 取10支清洗干净且进行灭菌处理后的西林瓶，每个西林瓶中加入 1ml的冻干保护剂，后加入过夜培养后的1ml 菌液，盖上无菌橡胶塞，备注：需要保留出气孔，并做好标记后，存放于-80℃冰箱冷冻存储；
e. 细菌冻干机预热约30分钟后，迅速将已冷冻的菌液放在细菌冻干机上，打印几小时至十几小时不等细菌已冻干。
f. 冻干后关闭冻干机，取出已经冻干好的细菌，压盖密封，存储在 -80℃条件下超低温冰箱保存，可存放数年。

本文到此结束，希望对大家有所帮助呢。