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能否构建出不需要诱导即能高效表达某基因的无致病性微生物？

宿主,病毒,细胞能否构建出不需要诱导即能高效表达某基因的无致病性微生物？

发布时间：2020-12-06加入收藏来源：互联网点击：

能否构建出不需要诱导即能高效表达某基因的无致病性微生物？

回答于 2019-09-11 08:43:50

回答于 2019-09-11 08:43:50

提问者的这个问题比较有深度，而且逻辑很严密，基于自己的认知我愿意论述一下我在课题中应用这一技术的具体细节，希望对你能够有所帮助。

三个条件分别是：不需要诱导、高效表达和无致病性微生物。

这个问题其实在我们的研究其实已经有所应用，下面以我自身的研究方向解释一下具体应用和具体试验技术。我是从事流感病毒研究，这一方面的研究主要包括对病毒生物学特性的研究，病毒的流行病学调查、疫苗的研发和抗病毒药物的研发，而在抗病毒药物研发方面，首先就要弄明白病毒入侵宿主细胞的机制和宿主因子影响病毒入侵宿主细胞的机制。假设我们筛选得到一个宿主因子a，能够非常显著的影响病毒入侵宿主细胞的过程，为了研究这个宿主因子的功能，我们就需要将这个基因高效稳定的在细胞中表达来研究其对病毒复制和入侵宿主细胞的影响，这个技术成为过表达细胞系，就是利用可以逆转录出慢病毒的并且含有基因a的质粒在修饰过的细胞系中逆转录出慢病毒，将该慢病毒纯化浓缩以后侵染细胞，可以将该基因插入到宿主细胞的基因组中稳定表达，从而得到稳定表达基因a的过表达细胞系。具体过程如下：

1、将基因a片段插入到pqcxin载体中。

2、用构建的质粒转染ap293细胞，几天内取上清，即为表达a基因慢病毒。

3、浓缩病毒侵染a549细胞，药物筛选阳性细胞。

4、鉴定阳性细胞分选克隆，并扩大培养，鉴定过表达阳性克隆。