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油镜的使用步骤-油镜的使用步骤及注意事项
培养基,微生物,放线菌油镜的使用步骤-油镜的使用步骤及注意事项
发布时间：2019-02-08加入收藏来源：互联网点击：
实验五 放线菌及霉菌形态观察
一、实验目的
1、了解放线菌、霉菌形态观察的原理;
2、学习并掌握观察放线菌、霉菌形态的操作方法;
3、初步了解放线菌、霉菌的形态特征.
二、实验原理
放线菌是指能形成分枝丝状体或菌丝体的一类革兰氏阳细菌.常见放线菌大多能形成菌丝体,紧贴培养基表面或深入培养基内生长的叫基内菌丝(简称“基丝”),基丝生长到一定阶段还能向空气中生长出气生菌丝(简称“气丝”),并进一步分化产生孢子丝及孢子.有的放线菌只产生基丝而无气丝.在显微镜下直接观察时,气丝在上层、基丝在下层,气丝色暗,基丝较透明.孢子丝依种类的不同,有直、波曲、各种螺旋形或轮生。
霉菌可产生复合分枝的菌丝体,分基内菌丝和气生菌丝,气生菌丝生长到一定阶段分化产生繁殖菌丝,由繁殖菌丝产生孢子.霉菌菌丝体(尤其是繁殖菌丝) 及孢子的形态特征是识别不同种类霉菌的重要依据.霉菌菌丝和孢子的宽度通常比细菌和放线菌粗得多,常是细菌菌体宽度的几倍至几十倍,因此,用低倍显微镜即可观察.人们设计了各种培养和观察方法,这些方法的主要目的是为了尽可能保持放线菌自然生长状态下的形态特征.本实验采用插片法。
插片法：将放线菌接种在琼脂平板上,插上灭菌盖玻片后培养,使放线菌菌丝沿着培养基表面与盖玻片的交接处生长而附着在盖玻上.观察时,轻轻取出盖玻片,置于载玻片上直接镜检.这种方法可观察到放线菌自然生长状态下的特征,而且便于观察不同生长期的形态。
三、试剂与器材
1、材料 黑曲霉、青霉和根霉,细黄链霉菌或青色链霉菌,灭菌的高氏I号琼脂和灭菌的查氏培养基。
2、实验器材 经灭菌的:平皿、玻璃纸、无菌吸管、盖玻片、玻璃涂棒,以及载玻片、接种环、接种铲、镊子、显微镜等。
四、实验内容
倒平板→接种→插片→培养→镜检
五、关键步骤及注意事项
1、倒平板要厚一些,接种时划线要密.
2、插片时要有一定角度并与划线垂直.
3、观察时,宜用略暗光线;先用低倍镜找到适当视野,更换高倍镜观察.
4、如果用0、1%美蓝对培养后的盖玻片进行染色后观察,效果会更好.
六、思考题
1、镜检时,你如何区分放线菌的基内菌丝和气生菌丝？
2、你认为霉菌和放线菌菌丝的主要区别是什么？
实验六 革兰氏染色及芽孢染色
一、实验目的
1、了解革兰氏染色法和芽孢染色法的原理,并掌握其操作方法;
2、了解革兰氏染色法在细菌分类鉴定中的重要;
3、学习并掌握微生物涂片、染色的基本技术和无菌操作技术;
4、学习显微镜(油镜)的使用方法;
5、初步认识细菌的形态特征.
二、实验原理
革兰氏染色法的基本步骤是:先用初染剂结晶紫进行染色,再用碘液媒染,然后用乙醇(或丙酮)脱色,最后用复染剂(如番红)复染.经此方法染色后,细胞保留初染剂蓝紫色的细菌为革兰氏阳菌;如果细胞中初染剂被脱色剂洗脱而使细菌染上复染剂的颜色(红色),该菌属于革兰氏阴菌.革兰氏染色反应是细菌重要的鉴别特征,为保证染色结果的正确,采用规范的染色方法是十分必要的.芽孢染色法的基本原理,用着色力强的染色剂孔雀绿或石炭酸复红,在加热条件下染色,使染料不仅进入菌体也可进入芽孢内,进入菌体的染料经水洗后被脱色,而芽孢一经着色难以被水洗脱,当用对比度大的复染剂染色后,芽孢仍保留初染剂的颜色,而菌体和芽孢囊被染成复染剂的颜色,使芽孢和菌体更易于区分。
三、试剂与器材
1、材料:枯草芽孢杆菌12～18h营养琼脂斜面培养物,大肠杆菌约24h营养琼脂斜面培养物
2、试剂 革兰氏染色液(结晶紫液、碘液、95％乙醇、番红液).5％孔雀绿水溶液
3、实验器材 小试管、滴管、烧杯、试管架、滤纸、木夹子、载玻片、盖玻片、凹载玻片、无菌水、显微镜等、接种环、双层瓶(内装香柏油和二甲苯)、擦镜纸、生理盐水等.
四、实验内容
1、革兰氏染色法 制片→初染→媒染→脱色→复染→镜检.
2、Schaefer-Fulton氏染色法 制片→染色→水洗→复染→水洗→镜检.
五、关键步骤及注意事项
1、涂片时,生理盐水及取菌不宜过多,涂片应尽可能均匀。
2、乙醇脱色是革兰氏染色操作的关键环节,严格掌握脱色时间。
六、思考题
1、你认为要得到正确的改良的革兰氏染色结果必须注意哪些操作？关键在哪一步？为什么？
2、现有一株细菌宽度明显大于大肠杆菌的粗壮杆菌,请你鉴定其革兰氏染色反应.你怎样运用大肠杆菌和金黄色葡萄球菌为对照菌株进行涂片染色,以证明你的染色结果正确。
3、你的染色结果是否正确？如果不正确,请说明原因。
4、若涂片中观察到的只是大量游离芽孢,很少看到芽孢囊及营养细胞,你认为这是什么原因？
5、说明芽孢染色法的原理.用简单染色法能否观察到细菌的芽孢？
实验七 酵母菌的形态观察及活细胞的鉴定
一、实验目的
1、观察酵母菌的形态特征、出芽生殖方式,并掌握酵母菌与细菌形态特征的区别。
2、学习鉴别活细胞的实验方法。
二、实验原理
酵母菌是单细胞的真核微生物,菌体比细菌大而且不运动.酵母菌的繁殖方式分为无繁殖和有繁殖两种,以无繁殖为主.芽殖是酵母菌普遍的无繁殖方式,少数为裂殖;有繁殖是产生子囊和子囊孢子.本实验是通过美蓝染液水浸片和水一碘液水浸片来观察酵母的形态和芽殖方式。
美蓝是一种无毒的染料,它的氧化型呈蓝色,还原型无色.用美蓝对酵母活细胞染色时,由于细胞的新陈代谢作用,细胞内具有较强的还原能力,能使美蓝由蓝色的氧化型变为无色的还原型,而对代谢作用微弱或细胞,无此还原能力或还原能力极弱,而被美蓝染成蓝色或淡蓝色.因此,不仅用此法可观察酵母细胞形态,也可用来鉴别酵母菌的细胞和活细胞。
三、试剂与器材
1、材料 酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)或卡尔酵母(Saccharomyces calsbergensis)培养2天左右的麦芽汁(或豆芽汁)液体培养物。
2、试剂 0.05％和O.1％吕氏碱美蓝染色液、革兰氏染色用的碘液。
3、器材 显微镜、载玻片、盖玻片、接种环、洒精灯等。
四、实验内容
1、美蓝浸片观察 酵母培养→制片→染色→镜检→30分钟后再镜检
2、水-碘浸片观察
五、关键步骤及注意事项
1、染液不宜过多或过少,否则,在盖上盖玻片时,菌液溢出或出现大量气泡。
2、用镊子取一块盖玻片,先将一侧与菌液接触,然后慢慢将盖玻片放下,使其盖在菌液上,盖玻片不宜平着放下,避免气泡产生。
六、思考题
1、吕氏碱美蓝染液浓度和作用时间的不同,对酵母菌细胞数量有何影响？试分析其原因.
2、在显微镜下,酵母菌有哪些突出的特征区别于一般细菌？
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