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关于jiangzem的信息

光谱,细胞,干细胞关于jiangzem的信息

发布时间：2020-12-06加入收藏来源：互联网点击：

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医用电纺聚酯纤维 孙苒 学习翻译

使用同步加速器红外显微光谱法在电纺聚酯纤维上生长的大鼠胚胎干细胞的生化分析

孙苒 学习翻译2019-03-25

Ernesto Doncel-Pérez加里埃利斯克里斯托夫桑特Peter S. Shuttleworth阿加莎巴斯蒂达朱莉娅RevueltaEduardoGarcía-JuncedaAlfonsoFernández-Mayoralas莱昂西奥加里多

研究亮点：

使用同步加速器红外显微光谱法在电纺聚酯纤维上生长的大鼠胚胎干细胞的生化分析

成果简介

神经前体细胞分化：免疫染色

图1a-i

在特定时间在P（HB- co -HHx）底物上的神经前体细胞的差异巢蛋白和GFAP表达。这些图显示了巢蛋白（红色）和GFAP（绿色）抗体的免疫染色结果和细胞核（蓝色）的DNA荧光图像。在涂有PLL /层粘连蛋白（f）的纤维中48小时观察到最高数量的GFAP +细胞，并且在48小时时层粘连蛋白涂覆的纤维（i）中观察到最低数量的GFAP +细胞。比例尺 =100μm

FTIR显微光谱

图2

在培养24小时后获得的对应于涂有聚-L-赖氨酸和层粘连蛋白的P（HB- co -HHx）纤维上的NPC的明视野显微图像（约1.4mm×1.2mm）的马赛克

图3

所有印记数据集和不同培养时间后细胞的ZnS IR窗口的平均红外光谱（3700-850 cm -1）

在光谱数据的初始统计分析中，培养时间是考虑的唯一实验变量，并且观察到光谱明确划分为三组。在图4一，播种上的三个类型的衬底的后的NPC 3，24，和48个小时的平均二阶导数光谱。可以看出，与分别在2922和2852cm -1处的主要脂质亚甲基部分的不对称和对称拉伸模式相关的条带的强度最初增加但随后减小，使得它们在48小时时显着下降。对于1741 cm -1处的脂质酯羰基带和1468 cm处的脂质亚甲基变形模式，也观察到相对强度的相同变化模式。-1（图4 b）中。

图4a-b

3小时NPC的平均二阶导数光谱（P（HB- co -HHx）/ PLL / L; P（HB- co -HHx）/ L和ZnS IR窗口/ L），24小时（P-（HB-）co -HHx）/ PLL / L; P（HB- co -HHx）/ L和ZnS IR窗口/ L）和48小时（P（HB- co -HHx）/ PLL / L和P（HB- co） -HHx）/ L）接种后，示出了光谱之间的差异一脂质区域（3050-2800厘米-1）和b酰胺I-II的区域（1800至1400年厘米-1）

统计分析

图5

对于三种类型底物上神经祖细胞的光谱，PCA 1与PC-2评分（上图）和PC-1上样（下图）的PCA图。数据分析中包括的光谱区域为3050-2800 cm -1（左下）和1800-1400 cm -1（右下）

在基于基质类型分组的细胞的二阶导数光谱上进行的PCA产生改善的生物化学谱的聚类作为培养时间的函数，特别是对于底物P（HB- co -HHx）/ PLL / L和ZnS / L （参见ESM中的图S5a和c）。然而，P（HB- 共 -HHx）/ L的支架表现出更宽的重叠（见图S5在ESM b）中。通过分析光谱区域（组合的脂质和酰胺I-II带），不可能在每个培养时间区分底物类型和包衣。如前所述，由于所有底物在给定的培养时间显示出相似的脂质谱，因此只考虑1800和1400 cm -1之间的光谱区域的分析表演了。图6显示了在研究的三种类型的底物上培养3,24 和48小时NPC的酰胺I-II光谱区域的选定2D PCA评分图：P（HB- co -HHx）/ PLL / L（ PC-1与PC-4），P（HB- co -HHx）/ L（PC-2与PC-3）和IR窗口/ L（PC-2与PC-5）。虽然这些组之间的显着重叠是明显的，特别是在3小时时，根据基质/涂层的类型存在明显的分离倾向。图6中的加载图表明，这些结果主要是由于前面提到的NPC剖面带的变化：与β-转角相关的酰胺I带（~1690 cm -1），α-螺旋（~1660 cm）-1）和β-折叠（1638-1622厘米-1）蛋白质，以及1512 cm -1处的酰胺II带，与β转角密切相关[ 43 ]。

图6a-c

在从NPC的PCA得分和负荷为光谱的曲线图一 3小时，b 24个小时，和Ç 48小时接种的三个类型的衬底[P（HB-的后共 -HHx）/ PLL / L（蓝色正方形）， P（HB- co -HHx）/ L（黄色圆圈）和ZnS / L（绿色三角形）]。分析中包括的光谱区域为1800-1400cm -1

小结

神经祖细胞在涂有层粘连蛋白或poly- L的静电纺丝P（HB- co -HHx）纤维基质上培养赖氨酸/层粘连蛋白。在细胞接种后的不同时间，固定样品并使用改进的触摸压印细胞学方法将纤维上的细胞材料部分转移到IR窗口上。该策略被证明是非常有效的并且使得能够用SIRMS测定在涂覆的聚合物纤维上产生的NPC的生物化学特征。观察到脂质和酰胺I-II区域中的条带强度受基质类型和包衣以及培养时间的影响。这些结果证明了SIRMS研究可以为NPC对生物材料（在这种情况下对聚合物支架的形态和表面化学）的反应提供的重要见解。

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